信帆生物：常見的ELISA試劑盒的兩種反應方法
間接法
間接法常用於檢測抗體，一般之操作步驟為：間接法常用于檢測抗體，一般之操作步驟為：
- 將已知之抗原固著於塑膠孔盤上，完成後洗去多餘之抗原將已知之抗原固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余之抗原
- 加入待測檢體，檢體中若含有待測次抗體，則其會與塑膠孔盤上的抗原進行專一性鍵結加入待測檢體，檢體中若含有待測次抗體，則其會與塑膠孔盤上的抗原進行專一性鍵結
- 洗去多餘待測檢體，加入帶有酵素之二次抗體，與待測次抗體鍵結洗去多余待測檢體，加入帶有酵素之二次抗體，與待測次抗體鍵結
- 洗去多餘未鍵結二次抗體，加入酵素受質使酵素呈色，藉儀器（ELISA reader）測定塑膠盤中的吸光值（OD值），以評估有色終產物的含量即可測量待測抗原的含量。洗去多余未鍵結二次抗體，加入酵素受質使酵素呈色，借儀器（ELISA reader）測定塑膠盤中的吸光值（OD值），以評估有色終產物的含量即可測量待測抗原的含量。
競爭法
競爭法是一種較少用到的ELISA檢測機制，一般用於檢測小分子抗原，其操作步驟為：競爭法是一種較少用到的ELISA檢測機制，一般用于檢測小分子抗原，其操作步驟為：
- 將具有專一性之抗體固著於塑膠孔盤上，完成後洗去多餘抗體將具有專一性之抗體固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗體
- 加入待測檢體，使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結加入待測檢體，使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結
- 加入帶有酵素之抗原，此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結，由於塑膠孔盤上固著的抗體數量有限，因此當檢體中抗原的量越多，則帶有酵素之抗原可鍵結的固著抗體就越少，亦即，兩種抗原皆競相與塑膠孔盤上抗體鍵結，即所謂競爭法之由來。加入帶有酵素之抗原，此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結，由于塑膠孔盤上固著的抗體數量有限，因此當檢體中抗原的量越多，則帶有酵素之抗原可鍵結的固著抗體就越少，亦即，兩種抗原皆競相與塑膠孔盤上抗體鍵結，即所謂競爭法之由來。
- 洗去檢體與帶有酵素之抗原，加入酵素受質使酵素呈色，當檢體中抗原量越多，代表塑膠孔盤內留下之帶有酵素的抗原越少，顯色也就越淺。洗去檢體與帶有酵素之抗原，加入酵素受質使酵素呈色，當檢體中抗原量越多，代表塑膠孔盤內留下之帶有酵素的抗原越少，顯色也就越淺。
當需要偵測無法獲得兩種以上單一性抗體的抗原，或是不易得到足夠的純化抗體以固著於孔盤上時，一般會考慮使用競爭法ELISA。當需要偵測無法獲得兩種以上單一性抗體的抗原，或是不易得到足夠的純化抗體以固著于孔盤上時，一般會考慮使用競爭法ELISA。
信帆生物：常見的ELISA試劑盒的兩種反應方法
原創作者：南京信帆生物技術有限公司
