乙酰輔酶 A檢測試劑盒檢測原理
測定意義
乙酰輔酶 A 廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中。是生物體能源物質代謝過程中產生的一種重要的中間代謝產物。在體內能源物質代謝中是一個樞紐性的物質。糖、脂肪、蛋白質三大營養物質通過乙酰輔酶 A 匯聚成一條共同的代謝通路-三羧酸循環和氧化磷酸化，經過這條通路徹底氧化生成二氧化碳和水，釋放能量用于 ATP 合成。此外，乙酰輔酶A 是合成脂肪酸，酮體，膽固醇及其衍生物等生理活性物質的前體物質。
蘋果酸脫氫酶可催化蘋果酸和 NAD 生成草酰乙酸和 NADH。檸檬酸合酶可催化乙酰輔酶 A和草酰乙酸生成檸檬酸和輔酶 A。利用蘋果酸脫氫酶和檸檬酸合酶的偶聯反應，乙酰輔酶 A含量和 NADH 的生成速率成正比，340nm 下吸光值的上升速率反應了乙酰輔酶 A 含量的高低。
乙酰輔酶 A 的提取
1、細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104個）：試劑一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 試劑一），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
2、組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 試劑一），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
注意：本試劑盒檢測限為 1.6nmol/mL。 （1）按照蛋白濃度計算
乙酰輔酶 A含量(nmol prot)=[(3280×ΔA＋0.024) ×V1]÷(V1×Cpr)=(3280×ΔA＋0.024) ÷Cpr需要另外測定，建議使用本公司 BCA 蛋白質含量測定試劑盒。
按照樣本質量計算
乙酰輔酶 A 含量（nmol/g 鮮重）=[(3280×ΔA＋0.024) ×V1]÷(W×V1÷V2)=(3280×ΔA＋0.024) ÷W
按照細菌或細胞密度計算：
乙酰輔酶 A 含量（nmol/104）=[(3280×ΔA＋0.024)×V1]÷(500×V1÷V2)=(3280×ΔA＋0.024)÷500
V1：加入反應體系中樣本體積，0.025mL；V2：加入提取液體積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質
濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細胞或細菌總數，500 萬。
