025-66060117
訂購熱線
025-66060117
訂購熱線
閱讀次數：367 發布時間：2023/7/25 17:19:28
講解ELISA試劑盒的正確操作步驟
信帆生物提供高靈敏度，特異性好，即用型的ELISA試劑盒，長期與全國各大高校合作，引用文獻上千篇。
ELISA試劑盒包含預包被酶標板、檢測抗體、鏈酶親和素標記的HRP、標準品、TMB顯色液、終止液、洗液、封板膜、檢測緩沖液等10個成分。
ELISA在操作前試劑和組分都先恢復到室溫，標準品、質控品和樣品，建議做復孔。ELISA緩沖液配制
吸取5毫升10x Assay Buffer緩沖液，至50ml離心管，吸取50ml20x洗液至1升量筒，加蒸餾水至1000毫升。
加樣注意事項：
取出已恢復至室溫的酶標板，加入300微升洗液，以洗去包被抗體保護劑，使包被抗體處于*佳活性狀態，靜置浸泡30秒。洗板結束后，立即使用酶標板，不要讓酶標板干燥。
排版布局H1、H2孔為空白孔，A1、A1至G1、G2為標準曲線的S1至S7孔，每孔加入50微升的Assay Buffer，根據排版，每孔加入50微升標準品和樣本，加樣時，垂直懸空加入液體，加完后槍頭輕輕碰液面（建議標準品，樣本都做復孔），*后每孔加入50微升檢測抗體，加完后用封板膜小心封好酶標板，為讓抗原抗體充分接觸。
洗滌注意事項：
洗滌在ELISA過程中雖不是一個反應步驟，但卻決定著實驗的成敗。ELSIA就是靠洗滌來達到分離游離的和結合的酶標記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結合的物質，以及在反應過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質。聚苯乙烯等塑料對蛋白質的吸附是普遍性的，而在洗滌時應把這種非特異性吸附的干擾物質洗滌下來?？梢哉f在ELISA 操作中，洗滌是主要的關鍵技術，應引起操作者的高度重視，操作者應嚴格按要求洗滌，不得馬虎。
計算方法：
檢測完成后，以標準品濃度做為縱坐標，對應的吸光度（OD值）作為橫坐標，利用計算機軟件，采用四參數Logistic曲線擬合（4-pl），創建標準曲線方程，通過樣本的吸光度（OD值），利用方程計算樣品的濃度值。如果樣品被稀釋，通過上述方法測的的濃度值，要乘以稀釋倍數，才是樣品的終濃度。
抄筆記總結：
1. 從室溫平衡60min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3. 待測樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；
4. 隨后標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。
信帆生物是專業的ELISA試劑盒供應商，提供大鼠ELISA試劑盒，小鼠ELISA試劑盒，人ELISA試劑盒等等，產品質量穩定，庫存充足，價格實惠，深受廣大科研用戶青睞。
講解ELISA試劑盒的正確操作步驟-讓你看完豁然開朗
