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閱讀次數：5613 發布時間：2016/4/5 21:49:21
進實驗室這么長時間了，每一天都好像過得很艱難，每一項實驗的完成都很辛苦，其中的每一個細節都不能大意，不然做得一切都要前功盡棄。實驗室里沒有人做細胞爬片，我連見都沒見過，老板的實驗卻要求這個東西，只能自己摸索。查資料 搜信息，自己實踐，終于做出了可以用來后期實驗的細胞爬片。
總結經驗如下：
首先是玻片的處理，普通的蓋玻片用砂輪劃成自己要的大小的小方塊，先用洗衣粉洗干凈，用水沖靜烤干，然后泡酸過夜，撈酸后流水洗凈，烤干，置于器皿中高壓滅菌，然后再烤箱中大約8小時烤干備用。
爬片可以在培養皿 六孔板或24孔板中都可，我選擇在培養皿中爬。一為節約經費(培養皿可以重復利用)二來覺得培養皿口大，操作比較方便。培養皿消毒同上，消毒時記得消兩把鑷子。
具體操作是：用胰酶消化好細胞，充分吹打，使之成單細胞懸液(注意：這一點很重要，關系到將來爬出來片子的質量)。
取出消毒的培養皿，可以先加少量培養基(以使玻片與培養皿緊密接觸)，將玻片小心放入擺放其中，然后將單細胞懸液一滴一滴的滴到玻片上。*后蓋上培養皿置于37度5%CO2的暖箱中培養，根據細胞生長狀況，24小時或更長時間適時取出爬片。
爬片置于37度PBS中洗三次，每次3到5秒鐘，然后在4%多聚甲醛中固定15分鐘，然后再用37度去離子水將甲醛沖干凈，注意手法輕柔，要不然掉片很厲害。同時操作過程中注意玻片的正反面，要不然真的是前功盡棄。
將做好的爬片置于濾紙上晾干，然后用中性樹膠粘在載玻片上。注意一定要等中性樹膠徹底干了之后才能做后續實驗，要不然玻片會掉下來的，就又是前功盡棄了 做好的細胞爬片可以放在-20保存備用，具體能保存多長時間不太清楚，當然盡量早用。
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原創作者：南京信帆生物技術有限公司
