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閱讀次數：5628 發布時間：2016/4/7 21:41:05
加州大學圣地亞哥分校的細胞生物學家Stephan Lange的論文手稿基本上都準備好了，這時他打算再檢查核對一下他的抗體：Lange對缺失G蛋白偶聯受體的小鼠樣品進行染色，按道理說抗體不會出現信號。然而結果卻是它顯色了，Lange只好把他論文中基于抗體的這部分刪去，而剩下的一部分卻不足以吸引人了。這令Lange失望極了，不過值得安慰的是，他并不是一個有此體驗的實驗人員，抗體可以說是生物學實驗室里*常用，也*容易出現問題的試劑，而且這種試劑還不便宜。Lange說，一般買來的抗體大約每100mg 200-500美元（當地價格），比黃金還貴（2016年1月的黃金價格為每克35.29美元）。而且有時這些“比黃金還貴的花銷”還會打水漂，來自Mol Cell Proteomics雜志的一項研究指出，在被檢測的5000種商用抗體中， 只有一半能在Western blotting和免疫組化實驗中均有效，一些研究人員還認為問題抗體是許多科學研究無法重復的罪魁禍首。
為此越來越多的科學家希望能提出更高的抗體標準，全球生物標準研究所（Global Biological Standards Institute）由此制定了抗體驗證準則和試劑操作手冊。但單單是這些并不夠，研究所主席Leonard Freedman指出，這還需要多方合作，比如雜志拒絕低標準驗證抗體發表論文，資助機構拒絕為可疑試劑提供資金等等。事實上，今年美國NIH將會要求基金申請人驗證他們使用的抗體，雖然目前還不影響評分。
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一些制造和出售抗體的公司也在嘗試梳理其產品目錄，執行更嚴格的驗證檢測，提高其試劑的公信力。如antibodies-online公司就已經開始與獨立檢驗單位Science Exchange 展開合作，為已驗證的抗體提供一個特殊的“獨立驗證”徽章。
新的標準開發進程需要時間，目前這一市場是“賣方擔保”，但從長期來看，*終抗體有效性的責任還是會落在買方肩上，“科學家們需要能確保他們所使用的每個抗體都經過了驗證，”來自洛斯阿拉莫斯國家實驗室的分子生物學家Andrew Bradbury說。雖然目前還無法完全做到這一點，The Scientist收集的一些小Tips也許能幫助你發現實驗中*靈敏，特異性*強，以及實驗可重復的抗體。
了解你所使用的抗體類型
多克隆抗體是對某個抗原產生應答的B細胞分泌的所有免疫球蛋白。為了得到多克隆抗體，步是將靶標蛋白注射入動物，一般是兔子，然后收集動物血清，血清中包含有幾種結合在靶標蛋白上的抗體，這些抗體親和力不同，而且也會有一些與抗原無關的抗體。通常針對同一靶標的多個抗體能提升實驗中的信號。
如果需要更一致的抗體，那么就要培養單個B細胞，將它們與永生細胞融合形成、雜交瘤細胞系，產生靶向特殊位點的單克隆抗體。從而找到生成目標抗體的培養基，利用細胞系大批量生產單克隆抗體。
然而即使是在單克隆培養體系中，細胞也有可能停止生成抗體，或者抗體基因發生突變，因此Bradbury指出是走多一步——通過編碼序列的DNA來確定單克隆抗體，而不是通過細胞系來確定。對于那些所謂的重組抗體，目標抗體基因應該來自B細胞，并且通過測序，當然前提是序列已經被公布的。無論細胞系發生了什么，采用了這一DNA或者序列的研究人員都可以得到確定的抗體，科學家們甚至可以調整序列，無需注射動物就能獲得新的抗體。
同時制造抗體的抗原也很重要，合成肽段也許能生成適用于Western blot的抗體（蛋白已經發生了變性），相反完整蛋白來源的抗體也許就無法檢測出變性了的蛋白。
做好實驗前工作
毋庸置疑，實驗前首先需要科學文獻，檢查一下其他研究人員追蹤你的興趣靶標時用的是什么抗體。一些廠家和網站（譬如 antibodypedia.com 和 CiteAb.com ）都會列出抗體參考文件。
仔細的翻查這些論文，來自Cell Signaling Technology 公司抗體研發部科學家Anthony Couvillon建議道?？纯催@些論文是否發表在著名期刊上？作者是否展示了全部Western blots，從中是否能看到其它非特異性條帶？他們是否用來合適的對照？
不要以為發表論文中采用*多的抗體就*適合你，挪威奧斯陸大學的蛋白質組學研究專家 Fridtjof Lund-Johansen說。通常每個人使用的都是前人次用的那個抗體。
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原創作者：南京信帆生物技術有限公司
