天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)檢測試劑盒(賴氏微板法)的注意事項

閱讀次數：4863 發布時間：2023/12/20 15:29:10

天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)檢測試劑盒(賴氏微板法)的注意事項

產品簡介：

轉氨酶是催化α-氨基酸和α-酮酸之間氨基轉換反應的一組酶，天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)舊稱谷草轉氨酶(GOT)主要存在于心肌、骨骼肌、肝臟，以心肌含量，肝臟次之，AST 能夠催化天門冬氨酸和 a-酮戊二酸的氨基轉移作用，形成谷氨酸和草酰乙酸。天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)檢測試劑盒(賴氏微板法)其檢測原理是 AST 催化天門冬氨酸與α-酮戊二酸之間的氨基轉移反應，其反應公式如下：

L-天門冬氨酸+α-酮戊二酸→草酰乙酸+L-谷氨酸

二硝基苯肼與α-酮酸反應生成相應的二硝基苯腙，在堿性條件下二硝基苯腙的吸收光譜有差異，通過酶標儀檢測在 500-520nm 處差異，以等摩爾濃度計算出丙酮酸的生成量，進而計算酶的活性。100T 該檢測試劑盒可檢測 50 個樣品(不含標準品)，該試劑盒僅用于科研領域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

自備材料：

1、蒸餾水或去離子水

2、離心管、水浴鍋或恒溫箱

3、96 孔板、酶標儀

操作步驟(僅供參考)：

1、準備樣品：

①血漿、血清樣品：血漿、血清按照常規方法制備，可以直接用于本試劑盒的測定，-20℃

保存 1 個月有效，用于 AST/GOT 的檢測。

②細胞或組織樣品：取恰當細胞或組織進行勻漿，低速離心取上清，-20℃保存 1 個月

有效，用于 AST/GOT 的檢測。

③(選做)樣品準備完畢后可以用 BCA 蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度，以便于后續計

算單位蛋白重量組織或細胞內的 AST/GOT 含量。

2、配制 AST 顯色基液(1×)：取 AST 顯色基液(5×)一份加入蒸餾水 4 份稀釋即可使用。

3、制作 AST 標準曲線：取丙酮酸標準 1 支，準確加入丙酮酸標準稀釋液 1ml，充分混勻，即配制成丙酮酸標準(100mmol/L)，4℃保存備用。臨用前，取適量的丙酮酸標準 (100mmol/L)，按丙酮酸標準(100mmol/L)：丙酮酸標準稀釋液=1：49 的比例混合，即為丙酮酸標準工作液-丙酮酸標準(2mmol/L)，按下表制備標準曲線。設定平行檢測孔，求平均值。

4、AST 酶促反應：按照下表設置對照孔、測定孔，溶液應按照順序依次加入，并注意避免

產生氣泡。如果樣品中的酶活性過高，可以減少樣品用量或適當稀釋后再進行測定。

5、AST 測定：混勻，室溫放置 5min，以蒸餾水調零，酶標儀 505nm 處測定對照孔、測定孔的吸光度(即為 A 對照、A 測定)。

計算：以標準活力單位(24、61、114、190)為橫坐標，以對應的吸光度為縱坐標，繪制標

準曲線，測定孔的吸光度減去對照孔的吸光度的差值(即 A 測定-A 對照)，從標準曲線查得AST活力單位。

參考范圍：成年健康人血清 AST：8~28 卡門單位/ml

注意事項：

1、二硝基苯肼顯色液溶解以后，如果仍然有結晶析出，應棄用。

2、 AST 顯色基液(5×)有一定腐蝕性，請小心操作。

3、 AST Assay buffer 使用前應 37℃提前孵育 5min。

4、由于賴氏法的特點，在繪制標準曲線時每個點做 3 孔的重復測定，求出各標準管的吸光度均值，減去“0”號管吸光度均值后，對照賴氏單位繪制標準曲線。

5、血清中 AST 活性在室溫可以保存 2 天，4℃保存 1 周，-20℃保存 1 個月。