2023產品更新-改良Lowry法蛋白定量試劑盒描述:
Lowry法蛋白定量應用Folin-酚試劑法原理如下:在堿性條件下,蛋白質與銅離子作用生成蛋白質-銅絡合物,此絡合物將Folin試劑還原,生成深藍色物質,其顏色深淺與蛋白含量成正比,線性范圍5~500ug/ml。Lowry法蛋白定量顯色反應主要與樣本中的酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸含量相關,樣品中含有酚類、檸檬酸和巰基化合物等可對反應產生干擾。此外,待測樣本也會因酪氨酸、色氨酸含量不同而使顯色強度稍有不同。
組成:
(1000次)
Folin 酚 A 100ml×2 室溫
Folin 酚 B 5ml 室溫
Folin 酚 C 20ml 室溫
R1 30ml 室溫
BSA蛋白標準品(5mg/ml) 1ml -20℃
以上試劑按要求溫度保存,有效期至少一年。
注意:試劑開封使用后請及時密閉保存,R3試劑顏色變成深綠色即失效。
所需設備:
比色計、酶標儀或微板比色儀,*佳工作波長650nm。
操作步驟:
1.根據樣本量,取適量Folin酚A和B按50:1混合,混合后24小時有效。
2.根據樣本量,取適量BSA標準品用R2稀釋10倍至濃度0.5mg/ml。
3.將標準品按 0、2、4、6、8、12、16、20ul加到96孔板中,加PBS補足至20ul。
4.將樣品作適當稀釋(多做幾個梯度),加20ul到96孔板的樣品孔中。由于移液器在取小量時的誤差,標準線前面的點誤差比較大,所以盡可能的讓樣品點落在標準線1/2后。
5.各孔加入配好的Folin酚A+B試劑200ul,混勻,室溫靜置10分鐘。
6.各孔加入20ulFolin酚C試劑,迅速混勻,37℃孵育30分鐘。酶標儀測定A650 OD值,繪制標準曲線,計算蛋白濃度。