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閱讀次數：345 發布時間：2023/12/27 14:35:25
維生素B2檢測試劑盒(熒光光度法)的操作步驟
產品簡介:
維生素 B2(Vitamin B2)又稱核黃素，是一種異咯嗪衍生物，耐熱、微溶于水，中性水溶液及乙醇溶液呈黃色，具有很強的熒光，在 pH 值 6~7 的溶液中熒光*強，在 pH=11時熒光消失，核黃素可被還原性物質還原為無色的二氫化物，同時失去熒光;二氫化物在空氣中易重新氧化，恢復其熒光。維生素 B2檢測試劑盒(熒光光度法)是利用 Vitamin B2的中性溶液有強熒光當加入有還原性的亞硫酸鹽時，核黃素被還原為無熒光的物質，根據稀核黃素溶液在還原前后熒光強度的變化即可定量檢測 Vitamin B2的含量，其激發波長為 440~500nm(多為460nm),發射波長為 510~550nm(多為 520nm)。該試劑盒僅用于科研領域，不適用于臨床診斷或其他用途。
自備材料
1、待測樣品如青菜、水果、牛奶、藥品等
2、蒸水、稀鹽酸或氫氧化鈉(0.1mol/L)
3、精密天平、今漿器、pH計或 pH試紙、離心機
4、離心管、維形瓶、容量瓶
5、高壓滅菌鍋或恒溫水浴鍋、熒光分光光度計
操作步驟(僅供參考):
1、稀釋組織勻漿液: 取適量的組織勻漿液(10x)，按組織漿液(10x): 蒸水=1:9 的比例稀釋，獲得 1x組織勻漿液，待用
2、樣品準備:
a)固體樣本:準確稱量 2~10g 樣品置于研磨器內研磨，加入少量 1x組織漿液，研磨碎留取上清，再次用 1x組織勻漿液研磨，*后一并倒入 50ml維形瓶，加入1x組織勻漿液至40ml，充分搖勻，置于高壓滅菌鍋內，121C下保持 30min，冷卻至室溫后用稀氫氧化鈉
調 pH 值至 6.0~6.5，用1x組織漿液定容至 50ml; 如樣品雜質較多，可在氧化鈉調至6.0 后立即用稀鹽酸再調 pH 值至 4.5,4000g 離心 5min 或者過濾，上清液或濾液再調 pH值至6.0~6.5，定容，濾液 4C保存備用。b)液體樣品 : 牛奶、飲料等液體樣品，取 5ml牛奶于 50ml 形中，加入 1x組織勻漿液至 40ml，以下操作同上
3、稀釋標準品: 取適量的 Vitamin B,標準(100pg/ml)，按 Vitamin B,標準(100pg/ml):蒸水=1:9 稀釋成 Vitamin B,標準(10pg/m)4C保存注意 :Vitamin B,標準(100Pg/ml)需要充分溶解混勻，否則會導致標準值不準確。
制備亞硫酸鹽工作液 :取一支亞硫酸鹽 100mg 粉末，充分解于 2m 蒸水，即配制成 50mg/ml的亞硫酸鹽工作液，即配即用，冰水浴保存，4 小時內有效，也可以用精密天平自行稱量落解。
5、Vitamin B,檢測 :選用恰當的濾色片，核黃素測定的激發波長為 460nm，發射波長為520nm，提前預熱儀器 30min，蒸水調零，以下表 6號管作參比洛液調熒光分光光度計的熒光強度讀數到滿刻度(100%) 分別測定其他標準洛液和樣品溶液的相對熒光強度，在測定中如果樣品溶液的熒光強度大于 100%，需要釋后再行測定測定加入亞硫酸鹽工作液前后的熒光值，分別記為 F。和F。加入亞硫酸鹽后，應立即混勻，并在 20s 內測出各管熒光值
以各管 Vitamin B標準的濃度(ug/ml)或含量(ug)為橫坐標，以對應的校正后的熒光強度(F)為縱坐標，做出 Vitamin B標準曲線
根據 Vitamin B標準曲線及樣品管的校正后的熒光強度(F)即可計算出待測樣品中Vitamin B,的實際濃度和含量。
100ml液體樣品中 Vitamin B含量(g/100ml= CxVx100N100g 固體樣品中 Vitamin B含量(g/100g)=CxV;x100/m
式中: C=待測樣品中 Vitamin B的濃度(g/ml)
V,=檢測體系中加入的濾液體積(ml)=5
V,=液體樣本濾液的總體積(ml)= 50
V;=固體樣品的上清液總體積(ml)= 50m=固體樣品的質量(g)
注意事項:
1、 Vitamin B,見光易分解，在上述操作中，應嚴格避免陽光直射
組織勻漿液為酸性，有腐蝕性，應小心操作。2、
待測樣品如不能及時測定，應置于 2~8”C避光保存3 天內穩定3Vitamin B,在堿性溶液中不穩定，因此在加稀氫氧化鈉調 pH 值時應邊加邊搖，防止4.局部堿度過大，破壞 Vitamin B2。
樣品提取液中如有色素，會吸收部分熒光，需要使用高錳酸鉀氧化除去色素Vitamin B不易被中等氧化劑或還原破壞，但有 Fe2”存在時，可被過氧化氫破壞7含核黃素的標準品或樣品一旦加入亞硫酸鹽后會因產生二氫化物失去熒光，但二氫化物在空氣中又易重新氧化，恢復熒光，因此應在 10min 內檢測完畢，而且越快越好.8、 如果樣品濃度過高，應用蒸餾水稀釋后重測，結果乘以稀釋倍數
有效期 :6 個月有效;4C運輸，4C保存.
維生素B2檢測試劑盒(熒光光度法)的操作步驟
