肝素親和素填料使用

肝素親和素填料使用

產品介紹

Heparin NUPharose FF和 Heparin NUPharose HP是肝素親和填料，是在紐龍生物經典的瓊脂糖凝膠層析介質基球 NUPharose上鍵合肝素而成。 FF為 Fast Flow的縮寫，具備快流速的特點，可用于快速純化蛋白質，適用性廣，易于放大。 HP為 High Performance的縮寫，具備分辨率高的特點。肝素親和的原理較為復雜，一般認為肝素與蛋白的結合是離子相互作用、氫鍵與范德華力等多種驅動力共同作用的結果。肝素填料主要用于凝血酶 III、凝血因子、脂蛋白、酯酶、激素、干擾素等的分離純化。也有文獻報道將肝素填料用于外泌體的純化。產品保留了瓊脂糖極好的親水性及大網架結構，與生物活性大分子有很好的相容性，具有載量高，非特異性吸附少，流速快等特點，適用于各種肝素親和層析。

使用方法參考

1、色譜柱裝填

以下闡述與層析系統連接時，填料的色譜柱裝填方法。

1 所有需要用到的材料的溫度要與色譜操作的溫度一樣，液體做脫氣處理。

2）填料用量計算：通過沉降定量填料體積，需要的沉降填料體積 =柱體積× 壓縮比（也稱壓縮因子）。沉降體積是指填料在 20%乙醇保存液中自然沉降完全讀取的穩定體積。 Heparin NUPharose FF的壓縮比為 ~1.15 Heparin NUPharose HP的壓縮比為 ~1.20。為使達到裝柱比，可通過柱頭下壓的方法，也可以通過高流速壓柱。

3）填料清洗：將填料懸液充分搖勻后量取相應體積，抽去液體，并用約 3倍填料體積的純化水洗滌，重復 3次，以除去保存液。

4）裝柱填料懸液準備：將填料轉移到適當的容器中，加入適量的裝柱液，制成50~75 v%的裝柱填料懸液原包裝中填料體積分數為使用前攪勻。

5 裝填前準備：在清洗干凈的層析柱下端加入裝柱液，以除去下墊片及層析柱下端的空氣，在柱內保留少量的蒸餾水擰緊下堵頭，調整柱子使其垂直于地面。

6 裝填將攪勻后的填料懸液一次性緩慢倒入層析柱內（必要時使用裝柱器）為避免引入氣泡，應使之沿層析柱內壁自然流下。將所有填料加入后，用裝柱液將裝柱器加滿，擰緊裝柱器上蓋，將柱子與層析系統連接。

7）壓柱：使柱內填料自然沉降（或 50~150 cm/h的低流速下沉降），待填料沉降完全后（填料與液體的界面清晰），去除裝柱器裝上上柱頭，并將柱頭下降至界面處通過高流速（推薦流速見下表，注意柱壓不超過 0.3 MPa 繼續壓柱至界面清晰穩定，標記界面穩定時的柱高。停泵，打開柱頭上的閥門 /堵頭，關閉柱底的閥門 /堵頭，下壓柱頭至標記位置下方與壓縮比對應的位置，旋緊柱頭，裝柱完成。裝柱完成后，需用高流速平衡柱內的填料。

填料保存

填料的初始保存液為 20%乙醇，含 50 mM醋酸鈉使用過后可繼續用相同的保存液。保存溫度在 4~8 ℃為宜不可凍存。

肝素親和素填料使用

更新時間：2024/4/19 16:25:06