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當前位置:南京信帆生物技術有限公司>產品中心>PCR引物合成服務 > 引物合成 > RT-PCR實驗代測
點擊次數：520 發布時間：2017/3/20 10:19:39
Real -Time PCR，即實時監測PCR擴增產物并進行解析的方法，它是在PCR反應體系中加入熒光物質，并通過Real -Time PCR檢測系統對PCR反應進程中的熒光信號強度進行實時監測，*終對實驗數據進行分析處理的方法。Real -Time PCR自1996年由美國Applied Biosystems公司推出以來，廣泛應用于生物研究的各個領域。目前主要有SYBR Green 染料、Taqman探針法兩種。
RT-PCR實驗代測
PCR實驗代測，熒光定量PCR代測服主要儀器及耗材
旋渦振蕩器 ：上海青浦瀘西儀器廠產品
手握式電動勻漿機：德國FLUKO 公司產品
低溫冷凍離心機：Sigma（3K15）公司產品
Real-time檢測儀：ABI （ABI-7300）公司產品
超純水分離系統：美國LABCONCO公司
離心管及10μL、200μL、1000μL槍頭等常規耗材均為國產；RNA提取過程中所需的離心管、槍頭等耗材經過0.1%的DEPC水浸泡過一夜，121℃滅菌30min，烘干后備用。
PCR實驗代測，熒光定量PCR代測服實驗室試劑的操作
1)所用的所有溶液都應該沒有核酸和(或)核酸酶(DNase和RNase)污染。
2)所有PCR試劑中使用的水都應該是高質量的-新鮮蒸餾的去離子水，用0.22μm過濾的，并且是高壓滅菌。
3)在20℃到25℃貯存的試劑建議加點像疊氮鈉一類的抗微生物劑，在擴增試劑或樣品制備試劑中加入0.025%的疊氮鈉不抑制擴增反應。
4)所用試劑都應該以大體積配制，實驗一下看試劑是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量進行貯存。
5)所有試劑和樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的瓶子和管子。
6)新配制的試劑在用于準備新的標本之前應該加以檢驗。
7)樣品準備和前PCR區所使用的移液管在不使用時都應該小心保存。
RT-PCR實驗代測
本程序適用于自動PCR操作，可適用于大多數情況，所用酶是不含核酸外切酶活性的熱穩定聚合酶，如Taq聚合酶等。
引物（各50pmol） 0.2mmol/L dNTPs（必須使用高質量的dNTPs，這一點非常重要。dNTPs經反復化凍后會發生降解，因此應分成小份保存。應注意混合物中四種dNTP的量要相等） 模板DNA：約0.05～1mg基因組DNA或0.002～0.02mg質粒DNA Taq DNA聚合酶（Perkin Elmer, Norwalk, Connecticut） 10×PCR緩沖液（500mmol/L KCl，15mmol /L MgCl2，100mmol/L Tris·HCl，pH 8.3） 礦物油
電泳所需試劑
【儀器設備】
PCR擴增儀
電泳裝置
微量離心機
微量移液器（1～20ml和20～200ml）
0.5ml Eppendorf 管
紫外線觀察裝置及照相設備
PCR代測,PCR技術服務,熒光定量PCR
信帆生物公司主要代理產品：
elisa試劑盒：進口elisa試劑盒,國產elisa試劑盒,人elisa試劑盒，大鼠ELISA試劑盒，小鼠ELISA試劑盒等。
培養基：微生物培養基,顯色培養基,BD培養基,gibco培養基等。
血清：胎牛血清,人血清,動物血清，NQBB,Hyclone，Gbico原裝血清 。
生物試劑：Amresco,Sigma,ABM,BIO-RAD,BD,ABCAM等進口試劑。
標準品對照品：進口對照品,進口對照藥材,進口標準品.
抗體：一抗,二抗，流式抗體等。
放免試劑盒：進口放免試劑盒，國產放免試劑盒，進口美國鳳凰等知名品牌放免試劑盒。
實驗室代測服務：放免代測，WB實驗，免疫組化代測，熒光定量PCR代測，病理細胞染色代測，生化實驗代測等。
更新時間：2024/1/3 11:50:32
